老宋翁熄高潮怀孕,永不迷路-黑料正能量在线,青春草无码精品视频在线观看,国产aⅴ激情无码久久久无码

7x24小時服務(wù)熱線
13906146072
當(dāng)前位置:技術(shù)支持 > 高速冷凍離心機(jī)在分離細(xì)胞核基質(zhì)中的應(yīng)用 技術(shù)文章

高速冷凍離心機(jī)在分離細(xì)胞核基質(zhì)中的應(yīng)用

點(diǎn)擊次數(shù):1854  更新時間:2019-08-01
核基質(zhì)是指真核細(xì)胞間核中除核被膜、染色體和核仁以外的一個精密網(wǎng)架系統(tǒng),既包含蛋白質(zhì),又包含RNA。核基質(zhì)是從純化的細(xì)胞核中分離的。要用去污劑、核酸酸處理細(xì)胞核。以分離核基質(zhì)的每一步中抑制核酸酶的活性非常重要。

本文介紹1986年Comerford使用過的分離細(xì)胞核基質(zhì)的方法和步驟。

1. 大鼠肝臟(50~100g)剪碎,加3倍體積的10mmol/L Tris-HCl、2mmol/L MgCl2、250mmol/L蔗糖、1mmol/L EDTA、1mmol/L PMSF(PH=7.4,4℃)。勻漿后通過幾層紗布過濾,在4℃,勻漿液以800gmax(用的是MSE Chilspin離心機(jī),4*100ml轉(zhuǎn)子,2100r/min)離心10分鐘。把沉淀重新懸浮在勻漿緩沖液里,該緩沖液包含56%(質(zhì)量濃度)蔗糖,再在4℃以60000gmax(用Sorvall OTD50超速離心機(jī),A641轉(zhuǎn)子,28000r/min)離心90分鐘。把沉淀用20mL勻漿緩沖液洗兩次。

2. 把細(xì)胞核沉淀重新懸浮在20mL STEM緩沖液中[STEM:50mmol/L Tris-HCl,50mmol/L MgCl2、250mmol/L蔗糖、1mmol/L EGTA、1mmol/L PMSF(PH=7.4,4℃)],加入四硫酸鈉,終濃度為0.2mmol/L。在4℃孵育后,加入N-乙酰馬來酰亞胺(N-ethylmaleimide,NEM),終濃度為5mmol/L。

3. 在800 gmax離心沉淀細(xì)胞核,并用20mL STEM洗三次,把細(xì)胞核重新懸浮在20ml STEM中,補(bǔ)加20μg/mL DNase I(Boehringer, grade I),在37℃孵育20分鐘,再在800 gmax離心回收沉淀。

4. 把沉淀懸浮在20mL LS緩沖液里[LS緩沖液:10mmol/L Tris-HCl,0.2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA、10mmol/L PMSF(PH=7.4,4℃)] ,在4℃孵育10分鐘, 再在800 gmax離心10分鐘回收沉淀。

5. 把沉淀重新懸浮在1mL 含有70%(質(zhì)量濃度)蔗糖的LS緩沖液里。上面鋪放3層蔗糖梯度,各2ml 60%,50%和40%(質(zhì)量濃度)蔗糖(用含2mol/L NaCl的LS緩沖液配制蔗糖溶液)。在800 gmax離心1小時,細(xì)胞核基質(zhì)在40%和50%蔗糖分離界面?;厥蘸笥肧TEM緩沖液(10ml)洗一次。

該方法可用于各種類型細(xì)胞核基質(zhì)的分離。  
聯(lián)系方式
  • 電話

    86-0519-82335255

在線客服
国产未成女younv仙踪林| chinese国产xxx实拍| 色综合久久88色综合天天| 乖把屁股撅起来喷出来h| 亚洲av永久无码精品国产精品| 美女性爽视频国产免费app| 伊人久久综合热线大杳蕉岛国| 久久99亚洲精品久久久久| 国产精品一亚洲av日韩av欧| 久久精品国产一区二区电影| 少妇口述与子做过爱| 97人妻丰满熟妇av无码| 12孩岁女a处破娇小| 全部孕妇毛片丰满孕妇孕交| 国产中老年妇女精品| 国产成人无码av| 老师洗澡时让我进去摸她那个| 久久aaaa片一区二区| 久久久综合精品一区二区三区| 久久桃花综合桃花七七网| 宝贝∽好硬∽好爽一再...| 最近免费中文字幕大全免费版视频| 玩弄丰满少妇高潮a片推油小说| 成人性毛片免费观看黄| 亚洲色欲久久久久综合网| 欧美性做爰片免费视频看不忠| 中国成熟妇女毛茸茸| 舐め犯し3波多野结衣| 欧美又粗又大xxxxbbbb疯狂| chinesemature老熟妇高潮| 久久久www成人免费精品| 丫头我就进一点忍一下-乖| 奇米777四色欧美在线视频| 极品尤物一区二区三区| 无码成人性爽xo视频在线观看| 色综合久久88色综合天天| 中文字幕人妻丝袜乱一区三区| 啊灬啊灬啊灬快灬高潮少妇a片| 浪货趴办公桌~h揉秘书| 一区二区三区中文字幕| 嫩模被强到高潮呻吟不断|